Atención 5to
Extracción de ADN vegetal
Los estudiantes extraerán ADN de bananas licuadas con agua.
Una parte de esta mezcla de banana, luego es tratada con shampoo y sal,
mezclada durante 5-10 minutos, y luego escurrida a través de un filtro de café.
A lo filtrado se le agrega alcohol frío y es éste el momento cuando el ADN de
la solución de banana se precipita y se hace visible.
El detergente disuelve los lípidos (moléculas grasas) y las
proteínas de la membrana celular, rompiendo las uniones que mantienen la
integridad de la misma. De esta forma se libera el contenido celular. Luego, el
detergente forma complejos con los lípidos y las proteínas, permitiendo que los
mismos sean separados del ADN por filtración. Así se libera el ADN. La sal
permite que el ADN precipite en una solución fría de alcohol y que las cadenas
de ADN no se corten.
Materiales:
• 1
tazas o vaso de plástico (por grupo)
• Una
cuchara plástica para medir y mezclar
• 2
filtros de papel de café Nº 2 (conos)
• 20
ml de agua destilada
• Shampoo
de color claro (o DETERGENTE)
• 1
banana
• Sal
de mesa, con o sin Iodo
• 1
pipeta de transferencia plástica o un gotero médico
• 1
tubo de ensayo sellado que contenga 95% de etanol o 91% de alcohol isopropílico
• 1
conservadora con hielo para enfriar los tubos con alcohol
• 1
varilla de vidrio o 1 pipeta Pasteur
Procedimiento
para la extracción del ADN
Preparar una solución de banana procesada con sal, agua
destilada y shampoo (detergente) mediante los siguientes pasos:
1.
Mezclar una banana por taza de agua destilada
(250ml).
2.
Revolver por 15-20 segundos, hasta que la solución
se mezcle.
3.
En una taza, preparar una solución consistente en
una cucharadita de té de shampoo y dos pizcas de sal.
4.
Agregar 20 ml (4 cucharaditas) de agua destilada.
5.
Disolver la sal y el shampoo revolviendo lentamente
con la cuchara de plástico evitando formar espuma.
6.
A la solución preparada en el paso 3, agregar tres
cucharaditas de té de la mezcla de banana del paso 1.
7.
Mezclar la solución con la cuchara por 5-10
minutos.
8.
Mientras uno de los miembros del grupo mezcla la
solución de banana, otro miembro pondrá el filtro Nº 2 de café dentro de otra
taza de plástico. Doblar el borde del filtro alrededor de la taza para que el
filtro no toque el fondo de la taza.
9.
Filtrar la mezcla vertiéndola dentro del filtro y
dejar que la solución drene por algunos minutos hasta que sean 5 ml aproximadamente
de filtrado para testear.
10.
Tomar un tubo de ensayo con alcohol frío. Para
mejores resultados el alcohol debe estar tan frío como sea posible.
11.
Llenar la pipeta plástica con la solución de banana
y agregarla al alcohol. El ADN no es soluble en alcohol. Cuando el alcohol se
agrega a la mezcla, los componentes, excepto el ADN, permanecen en la solución
mientras el ADN precipita en la capa de alcohol.
12.
Dejar la solución reposar por 2 a 3 minutos sin
mover. Es importante no batir el tubo de ensayo. Se puede observar el ADN
blanco el cual precipita en la capa de alcohol.
13.
Cuando se obtienen buenos resultados, habrá
suficiente ADN para levantar con una varilla de vidrio (el ADN se enrolla a la
varilla). O usando una pipeta de Pasteur que haya sido calentada en la punta
para formar un gancho, se puede recuperar (tomar) algo de ADN. El ADN tiene la
apariencia de mucus blanco y fibroso.
Conclusión:
Realizar un análisis sobre la experimentación,
donde se detalle procedimiento (paso a paso), la dificultad o no de cada uno de
ellos, y como fue lo observado (con interpretación). Sumarle fotos sobre los
diferentes momentos.
RECORDAR LAS PAUTAS DE PRESENTACION
DE LOS TRABAJOS.
